概述：甜美素是食物出产中常用的甜味增添剂，其甜度是蔗糖的30～40倍,节制限量对人们的身材安康有首要意思。《GB 2760-2014 食物增添剂利用规范》顶用于界定食物增添剂利用规模的食物分类体系，白酒属于蒸馏酒，不许可利用甜美素。本体例参照GB/T 5009.97-2003及相干文献材料，对白酒中的甜美素经提取后，在冰浴前提下，与亚硝酸钠产生重氮化反映天生衍生物环己醇亚硝酸酯，衍生物进入气相色谱质谱联用仪停止分手检测。
1 尝试局部
1.1 仪器与试剂
江苏天瑞(rui)仪(y♎i)器股分无(wu)限公司气相色谱-质谱联用仪(yi)：GC-MS 6800
甜美素规范储蓄溶液：称取必然量的甜美素规范品（纯度为99.0％）于枯燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg规范储蓄溶液。
试剂均为优级纯，尝试用水为二次蒸馏水。
1.2 仪器任务前提
1.2.1
气相色谱前提
DB-5毛细管色谱（30m ×0.25mm,0.25um）；载气：氦气（纯度为99.999％），载气流量1.0mL/min；进样口温度250℃，进样量1.0uL，进样体例为分流进样,分流比10:1；法式升温：初始温度为40℃，坚持时候10min，以25℃/min速度升至270℃，坚持时候5min。
1.2.2
质谱前提
电子轰击离子源（EI），四级杆温度150℃，接口温度280℃；收罗体例为挑选离子监测扫描（SIM），溶剂提早时候6min,挑选3个监测离子质荷比（m/z）为55,81,83。
1.3 尝试体例（略）
2 成果与会商
2.1 特点和离子的挑选
甜美素的首(shou)要(yao)衍生物(wꦿu)环己醇亚硝酸酯作为(wei)🅰定性和定量，如(ru)图(tu)1。保留时候8.511min.定性离子(zi)(zi)（m/z）为(wei)55,81,83。定量离子(zi)(zi)为(wei)55。质谱图(tu)见图(tu)2.
图1、柔美素双重性物在总正离子流色谱图
Figure 1、 Cyclamate derivatives total ionꦑ
chromatogram
图2、柔美素诞(dan)生物的质(zhi)谱图
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
图(tu)3𝓰、可爱素繁衍物在SIM打印下的亚铁(tie)离子流🔯(liu)色谱图(tu)
Figure 3、 Cyclamate
de൩riva💞tive SIM under scanning ion chromatogram
图4、柔美素产生物在SIM扫描(miao)机下的质谱图
Figure 4、 Cyclamate derivative SIM
under scanning spectru𝓀m
2.2 前处置前提挑选
2.2.1 诞生过程中在挑选
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，衍生反映时候别离设置为10min、20min、30min、40min、50min，考查反映时候对反映的影响。成果标明，跟着时候从10min升至30min，衍生物旌旗灯号呼应值逐步增添，跟着反映时候的耽误，呼应值反而呈现下降，是以，衍生反映温度30min最好。
2.2.2
硫酸浓度的挑选
精确吸收的1mL甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手50g/L的亚硝酸钠和别离为50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。成果标明，酸度从50g/L至100g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究衍生反映酸度为100g/L。
2.2.3 亚硝酸钠浓度对衍生反映的影响
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手100g/L的硫酸，和别离为30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亚硝酸钠。成果标明，酸度从30g/L至50g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究亚硝酸钠衍生反映为50g/L。
3 尝试数据
3.1 精密度和反复性尝试
精确移取(qu)储蓄(xu)液(ye)(ye)500uL于离心管中，用水定容(rong)20mL根(gen)据(ju)(ju)上(shang)述标样(yang)(yang)衍生(sheng)步骤停止衍生(sheng)化，衍生(sheng)物浓(nong)度为100ug/mL，平(ping)行制备(bei)反映液(ye)(ye)6次，用GC-MS测定。﷽考查(cha)衍生(sheng)体例的重现(xian)性(xing)和组分保留时候(hou)和峰(feng)面积的绝(jue)对(dui)规范(fan)误(wu)差，6个(ge)平(ping)行样(yang)(yang)的谱。成果(guo)标明，保留时候(hou)RSD为0.98%，峰(feng)面积RSD为6.00%,，具体尝试数(shu)据(ju)(ju)以下表1所示 。
表1、一直性自测成果展
Table 1, repeatable test results
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供试品头像框
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提取情况
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保持之时 RSD%
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峰面积计算
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峰大小RSD%
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1
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8.611
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0.98%
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96798
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6.00%
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|
2
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8.518
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99549
|
|
3
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8.406
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105518
|
|
4
|
8.431
|
99798
|
|
5
|
8.411
|
87708
|
|
6
|
8.410
|
96500
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3.2 线性干系和检测限
精确吸收浓度为10ug/mL的甜美素规范溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度别离为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，根据上述标样衍生化步骤停止衍生化，停止线性测试。尝试所得线性方程为：y=940.43x-3525.57，线性相干系数为0.9984，如图5所示。
图5. 线性干系图
Figure 5，Linear
3.3 收受接管率测试
挑选2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样增添浓度，对某品牌白酒停止收受接管率尝试，每一个浓度别离做三次平行样，按处置样品的体例处置加标后的样品并测试，接纳外标法定量，测试成果以下表2所示。
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质量浓度/mg/kg
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收受对接(jie)率(lv)1/%
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收受交接(jie)率2/%
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收受移(yi)交率3/%
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透亮收受接手率(lv)/%
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2
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109.6
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104.7
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107.7
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107.3
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50
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99.84
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113.7
|
103.5
|
105.7
|
|
200
|
108.3
|
114.9
|
116.7
|
113.3
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表2、收受接管率测试成果
Table 2, the recovery test results
3.4 现实样品测试
根据上🧸述样(yang)品处(chu)置体例对差别(bie)品类的(de)白(bai)酒样(yang)品停止(zhi)前处(chu)置和衍(yan)生(sheng)化(hua)，利(li)用(yong)GC-MS6800停止(zhi)测试，测试成(cheng)果以下表(biao)3所示：
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原辅料
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清(qing)甜素占比/mg/kg
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酒原材料1
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N.D.
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酒样本2
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N.D.
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酒样(yang)机3
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N.D.
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酒(jiu)检样4
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N.D.
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酒试样5
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N.D.
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注：“N.D”表现“未检出”
表3.、酒中甜美素含量测试成果
4 论断
本尝试接纳GCMS-6800，在SIM扫描形式下对酒中的甜美素停止测试和阐发，体例不变靠得住，线性规模好，活络度高，受杂质峰的搅扰小，可以或许有用地对酒中的甜美素停止定性定量阐发。
